组织RNA保存液（RNAstore）

表  1. 常见存放温度与其最长存放时间关系

保存温度	保存时间
37℃	两天 ( 保存三天的样品 RNA   有部分降解 )
18-25℃	一周 ( 保存两周的样品 RNA   有轻微降解 )
2-8℃	一个月
-20℃ 和 -80℃	长期

操作步骤

i   保存新鲜组织样品

1 ．估计完全浸没样品所需要RNAstore的量（1 g 组织需5 ml RNAstore）。

2 ．标记收集管并加入估计所需量的RNAstore。

3 ．以最快速度将样品剪切成厚度小于0.5cm 的碎块。

注意：鼠的肝、肾和脾等小器官样品和没有蜡质保护层的植物样品可不需剪切直接放入本产 品中保存，有蜡质保护层的植物样品需要先将蜡表皮破坏。

4 ．将组织碎块完全浸没于收集管里的RNAstore中。

5 ．保存时先将样本浸入 RNAstore   后置 4℃ 冰箱过夜（4℃ 过夜是必需的，这样可使RNAstore完全渗入到组织中），然后转移到 -20℃ 冰箱；或者在 4℃ 冰箱过夜后，从 RNAstore中取出组织块，转移到 -80℃ 冰箱。

6 ．RNA 提取：取出保存的组织样本，立即开始RNA 提取或进行其他处理。

ii   保存培养细胞，悬浮细胞和细菌

1 ．标记收集管。

2 ．将待保存的细胞样品转移到离心管中，离心收集细胞 / 细菌，弃上清。

3 ．用冰浴的缓冲液（ PBS ）洗涤一次。

4 ．将细胞悬浮在少量缓冲液中。

5 ．加入  5-10 倍体积的  RNAstore  ，混匀。

6 ．将收集管存放于适当条件下，存放时间不能超过该温度下的最长存放时 间（存放时 间见表  1 ）。

7 ． RNA 提取前样品处理：

1 ） 4℃ 保存的细胞样品需先离心，倒弃保护液并收集细胞。

2 ） -20℃ 或 -80℃ 保存的样品需先在室温下融 化。

8 ．立即开始  RNA 提取或进行其他处理。

iii   保存全血中的白细胞

1 ．先将白细胞从红细胞和血清中分离出来。

注意：不要将全血、血浆或血清中的RNA保存在RNAstore中，因为它们蛋白含量过高，与RNAstore混合后易形成不溶的沉淀。

2 ．用冰浴的缓冲液（ PBS ）洗涤一次。

3 ．将白细胞悬浮在少量缓冲液（ PBS ）中。

4 ．加入5-10倍体积的RNAstore,混匀。

5 ．将收集管存放于适当条件下，存放时间不能超过该温度下的最长存放时间 （存放时间 见表  1 ）。

6 ．RNA提取前样品处理：

1 ） 4℃ 保存的白细胞样品需先离心，倒弃保护液并收集细胞。

2 ） -20℃ 或 -80℃ 保存的白细胞样品需先在室温下融化。

7 .立即开始RNA提取或进行其他处理。

注意事项

1 ． RNAstore   保存中如果有沉淀，置于37℃ 溶解后使用。

2 ．要保存的组织样本的任何一边的最大厚度都不能超过  0.5 cm ，如果厚 度超过0.5 cm，RNAstore 渗入组织 样本中的速度将会减慢，由此会造成RNA降解，这时需要将组织样品切碎，使组织样本的任何一边厚度都少于  0.5 cm ，然后将处理好的组织块放到  5-10 倍体积的RNAstore 中保存。

3 ．保存于RNAstore 中的组织样品如果需要长途运输，运输过程中需要确保组织完全浸没在RNAstore 中。

4  ．若用该试剂保存植物叶片组织样本，则需将叶片表面蜡表皮破坏，因为植物叶片表面存在的蜡质使RNAstore很难完全渗入组织中，如果蜡表皮被破坏的植物叶片可以用该试剂进行保存。